制作重组DNA时的载体为什么最好要用多个限制性内切酶切点？
人教版高三选修本P50 倒数第二段“作为运载体必须有以下条件：……具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接……”
只要一个不是就够了吗？或者说是为了方便鸟枪法所以要越多越好？那如果是人工合成的目的基因的载体也是最好要多个吗？那是为什么？
参考答案:5月7日 19:50 限制性核酸内切酶根据其功能可分为一级和二级两大类。在基因重组，基因解析方面广泛使用的是二级，一般情况下识别由4~8个碱基构成的特定序列有选择地将其切断。一级限制性核酸内切酶则跟特定的碱基序列结合，切断位置上不具有特异性。
以典型的二级限制性核酸内切酶EcoRI为例，识别5’-GAATTC-3’这一序列（双链中的另外一条链为3’-CTTAAG-5’）将各链上连接G（鸟嘌呤）和A（腺嘌呤）之间的磷酸二酯键切断生成两个DNA的断片。
由该例子可见，在许多场合，限制性核酸内切酶识别的地方是一个回文序列（palindrome），在这个位置上呈锯齿状切断后给生成断片的末端一个单链部分（叫做附着末端）用同一种限制性核酸内切酶切断的断片的末端是互相吻合的，所以使用连接酶就很容易把这些结合起来。这就是 “剪刀与糨糊”这种说法的由来。