微生物检测-酵霉
请告知酵霉检测的方法步骤
以及培养液。
谢谢！
参考答案:菌落总数测定操作细则
菌落总数是指检样经过处理，在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。菌落总数主要作为判定检样被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在检样中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
1 设备和材料
1.1 温箱：36±1℃。
1.2 冰箱：0～4℃。
1.3 恒温水浴：46±1℃。
1.1 天平。
1.5 电炉
1.6 吸管。
1.7 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
1.8 玻璃珠：直径约5mm。
1.9 平皿：直径为90mm。
1.10 试管。
1.11 放大镜。
1.12 菌落计数器。
1.13 酒精灯。
1.14 均质器或乳钵。
1.15 试管架。
1.16 灭菌刀或剪子。
1.17 灭菌镊子。
2 培养基和试剂
2.1 营养琼脂培养基：按GB 4789.28中4.7规定。
2.2 磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。
2.3 生理盐水。
2.4 75%乙醇。
3 操作步骤
3.1 检样稀释及培养
3.1.1 以无菌操作，将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1∶100的稀释液。
3.1.3 另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。
3.1.4 根据检样卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
3.1.5 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照
3.1.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。
3.2 菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
3.3 菌落计数的报告
3.3.1 平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。
3.3.2 稀释度的选择
3.3.2.1 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。
3.3.2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。
3.3.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
3.3.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
3.3.2.5 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
3.3.2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
3.3.3 菌落数的报告
菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。