磺胺类多残留检测方法，寻求！！
食品中磺胺类残留的检测方法很多，传统的主要是液相色谱分析方法，但这种方法一次只能检测一个样，且只能检测单种磺胺类药物，如磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶等，检测费用一般都比较高，所以一般只在经费比较多的检测机构作确证试验。
目前对于普通政府质检机构、兽药监察所、商检局等，以及食品企业：农畜产品加工出口企业、水产企业、蜂蜜企业等大众基层实验室，应用最多的是酶连免疫吸附试剂盒方法，即ELISA方法。
ELISA方法相比较于仪器检测具有灵敏度高、检测成本低、快速方便，可同时大批量筛选，操作简单等优点，尤其对于磺胺类药物检测，例如北京望尔生物技术有限公司就出了磺胺3合1； 磺胺4合1； 磺胺7合1 多残留快速检测试剂盒，试剂盒同国内外同类产品比较质量稳定，变异系数比较小，因此举例：
一、概要
磺胺类药物（SAs）是应用广泛的抗菌素，对畜禽疾病控制和治疗起到重要作用。但由于磺胺类药物存在严重副作用，人体中长期存在磺胺药物会导致许多细菌对磺胺药物产生耐药性，且有潜在的致癌性。我国农业部第235号文件规定其残留限量为100μg/kg。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点, 操作时间约1小时，能最大限度地减少工作强度和操作误差，可用于动物组织（肌肉、肝脏等）、鸡蛋、牛奶、血清和蜂蜜等样本中磺胺类药物的残留检测。2005年10月，按农业部《关于加强兽药残留检测试剂（盒）管理的通知》（农办医〔2005〕3号）的要求，该试剂盒在农业部实行了备案（中华人民共和国农业部公告第558号文件）。
二、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑与微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗磺胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含磺胺药物的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中磺胺类药物的残留量。
试剂盒特性
试剂盒灵敏度：2ppb
样本回收率：
鸡肉/肝、猪肉/肝 ………………………………… 75±10%
鸡蛋 ……………………………………………… 69±10%
蜂蜜、牛奶、血清 ………………………………… 70±10%
交叉反应率：
磺胺嘧啶（SD或SDZ）…………………………… 100.0%
磺胺间甲氧嘧啶/磺胺六甲氧嘧啶（SMM）……… 97.6%
磺胺甲恶唑（SMZ）………………………………… 169.0%
磺胺噻唑（ST）……………………………………… 188.0%
酞酰磺噻唑（PST） ………………………………… 62.8%
磺胺甲噻二唑 …………………………………… 103%
磺胺吡啶 …………………………………………… 51.9%
磺胺对甲氧嘧啶 ………………………………… 15%
根据该试剂盒的交叉反应可以看出，该试剂盒可应用于：磺胺嘧啶（SD或SDZ）、磺胺间甲氧嘧啶/磺胺六甲氧嘧啶（SMM）、磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺噻唑（ST）、酞酰磺噻唑（PST）、磺胺甲噻二唑、磺胺吡啶等七种磺胺类药物的残留检测。七种磺胺类药物的检测下限在1—4ppb之间。
三、试剂盒组成
1、96孔酶标板 ×1块（包被有偶联抗原）
2、标准液×6瓶：（1ml/瓶）
0ppb， 2ppb， 4ppb， 8ppb， 16ppb， 32ppb
3、酶标二抗
4、抗体工作液
5、底物液 A 液
6、底物液 B 液
7、终 止 液
8、20×浓缩洗涤液
9、20×浓缩提取液
试剂盒样本前处理方法省略。
检测步骤：
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、按需取出微孔条及板架，将不用的微孔密封放入自封袋保存于2-8℃。
3、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4、加标准品/样本20ml/孔，然后加抗体工作液80ml/孔，盖板膜盖板，25℃环境中反应30min。
5、配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用蒸馏水或去
离子水稀释至800ml备用（或按需量稀释），稀释好的洗涤液在4℃环境可保存一个月，使用前也需回温。
6、取出甩出孔内液体，用洗涤液按250ml/孔，洗板4－5次，每次浸泡10秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
7、加酶标二抗100ml/孔，用盖板膜盖板后置25℃环境中反应20min，取出重复步骤6。
8、显色：每孔加入显色剂A液50ml，再加B液50ml，轻轻振荡混匀，25℃环境避光显色15min。（见注意事项8）
9、测定：每孔加入终止液50ml，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5min读完数据），测定吸光度值（OD值）。
10、将剩余试剂放入2-8℃环境中保存以备下次使用。
七、结果判定
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与磺胺类药物的含量成负相关。
1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范
围(µg/L)。假设样本1的吸光度值为0.211，样本2的吸光度值为0.785，标准液吸光度值分别是：0ppb为2.100；2ppb为1.580；4ppb为1.010；8ppb为0.580； 16ppb为0.308； 32ppb为0.120。则样本1的浓度范围是16ppb-32ppb乘以其对应的稀释倍数；样本2的浓度范围是4ppb-8ppb乘以其对应的稀释倍数。
2、定量测定
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值（%）＝B /B0 ×100%
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L 标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以磺胺标准品浓度（µg/L）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中磺胺类药物实际含量。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。
如需更多的磺胺类药物残留检测方法及详细说明书，可以联系北京望尔生物技术有限公司
联系人： 刘经理
电话： 010-***********
E-mail: pzwanger@163.com
参考资料：